Indhold

• Hovedforskel
• Southern Blotting vs. Western Blotting
• Sammenligningstabel
• Hvad er Southern Blotting?
• Hvad er Western Blotting?
• Vigtige forskelle
• Konklusion

Hovedforskel

Den største forskel mellem Southern Blotting og Western Blotting er, at Southern Blotting er en teknik, der bruges til at detektere et specifikt DNA-fragment i en given prøve, hvorimod Western Blotting bruges til at finde ud af et specifikt protein i en given prøve.

Southern Blotting vs. Western Blotting

Blotting er en teknik, der bruges af forskere til at adskille forskellige typer molekyler fra en blanding eller prøve. I denne teknik bevæger makromolekyler som nukleinsyrer (DNA og RNA) og proteiner i en blanding sig gennem en plade af gel. Her vil små partikler bevæge sig hurtigere end de større. Disse molekyler presses mod overfladen af ​​en immobiliseret membran, der overfører molekylerne til membranen. Der er forskellige typer blotting på basis af detektion af specifikt materiale, dvs. sydlig blotting, nordlig blotting og western blotting. Sydlig blotting er den type blotting, der bruges til at detektere DNA, mens western blotting bruges til at finde ud af protein. Southern blotting blev udviklet af Edward M. Southern i 1975. Så det er kendt som Southern blotting. På den anden side blev westernblotting udviklet af George Starks gruppe ved Stanford University i 1979. Dette navn blev brugt til at matche den sydlige blotting. Southern blotting bruges til at finde ud af en specifik DNA-sekvens, hvorimod western blotting bruges til at finde ud af en specifik aminosyre eller proteinsekvens.

Sammenligningstabel

Southern Blotting	Western Blotting
En teknik, der bruges til at finde ud af en specifik DNA-sekvens i en given blanding er kendt som sydlig blotting.	En teknik, der bruges til at finde ud af en specifik aminosyresekvens af proteinet i en given blanding er kendt som sydlig blotting.
Udviklet af
Southern blotting blev udviklet af Edward M. Southern i 1975.	Western blotting blev udviklet af George Starks gruppe ved Stanford University i 1979.
Type detektion
Sydlig blotting bruges til at finde ud af en specifik DNA-sekvens.	Western blotting bruges til at finde ud af en specifik aminosyre eller proteinsekvens.
Princip
Det fungerer på hybridiseringsprincippet.	Det virker på princippet om immunodetektionsmetode eller antigen-antistof-interaktion.
Probe
Et enkeltstrenget DNA eller undertiden RNA anvendes som en sonde.	Primære og sekundære antistoffer anvendes som en sonde.
Gelelektroforese
Agarosegelelektroforese anvendes i sydlig blotting.	SDS PAGE / Polyacrylamidgel anvendt til at adskille proteiner i western blotting
Blottingprocedure
Sydlig blotting følger kapillæroverførselsproceduren.	Western Blotting følger proceduren for elektrisk overførsel.
Prøve
Under den sydlige blotting skal prøven denatureres.	Under vestlig blotting bør prøven være i dens oprindelige tilstand.
Blokering
Intet trin som blokering er involveret i den sydlige blotting.	Under vestlig blotting blokeres ikke-specifikke antistofsteder på nitrocellulosepapiret ved hjælp af mælkepulver eller bovint serumalbumin (BSA).
Mærkningsmetoder
Almindelige mærkningsmetoder, der anvendes i sydlig blotting, er brugen af ​​kromogene farvestoffer eller radiomærkning eller fluorescerende mærkning osv.	Mærkningsmetoder, der anvendes til westernblotting, er brugen af ​​fluorescerende mærket antistof eller radiomærkning, kromogene farvestoffer eller dannelse af diaminobenzidin osv.
Opdagelsesmetoder
Påvisning af lys, Autoradiograf og farveændringer bruges som detektionsmetoder i den sydlige blotting.	Påvisningsmetoder i western blotting er ændringer i farve og detektion af lys osv.
Ansøgning
Sydlig blotting bruges til DNA-påvisning, faderskabstestning, DNA-fingering, til identifikation af offer, til identifikation af kriminelle, til at finde infektiøse agenser og til at identificere mutation eller genarrangement osv.	Western blotting bruges til at finde antallet af proteiner i en blanding, til at detektere tilstedeværelsen af ​​HIV, virus og bakterier osv. I serumet, til at finde ud af mangelfulde proteiner og bruges som et bestemt mål for herpes, hepatitis B, Lyme sygdom og Creutzfeldt-Jacob-sygdom osv.

Hvad er Southern Blotting?

Sydlig blotting er den ældste blottingmetode, der blev givet af Edwin Southern således, kaldet sydlig blotting. Det bruges til at finde ud af en specifik DNA-sekvens i en given prøve eller blanding. Trin involverer under sydlig blotting er elektroforese, overførsel og detektion af specifikke sekvenser. Først og fremmest fragmenteres DNA ved hjælp af specifikt restriktionsenzym. Derefter adskilles ønskede DNA-fragmenter gennem gelelektroforese. Disse fragmenter denatureres ved hjælp af en alkalisk opløsning, fx NaOH, etc. for at adskille de to DNA-strenge. Disse enkeltstrengede DNA-fragmenter overføres derefter til en membran gennem blottingprocessen. Dette membranbundne DNA behandles derefter med en mærket sonde. Denne sonde vil fastgøre til dens komplementære streng på membran-DNA, som kan visualiseres ved hjælp af autoradiogram osv.

Hvad er Western Blotting?

Western blotting-metode blev opfundet af George Starks gruppe ved Stanford University, der bruges til at identificere en specifik sekvens af aminosyrer i proteinet. Det er også kendt som protein blot eller immunblotting. Trinene under western blotting er elektroforese, overførsel og påvisning af specifikke proteiner. Først og fremmest homogeniserer blandingen. Adskil derefter molekylet af interesse ved hjælp af elektroforese. Overfør disse molekyler på membranen og identificer det specifikke protein ved hjælp af specifik probe.

Vigtige forskelle

1. En teknik, der bruges til at finde ud af en specifik DNA-sekvens i en given blanding er kendt som sydlig blotting, hvorimod en teknik, der bruges til at finde ud af en specifik aminosyresekvens af proteinet i en given blanding, er kendt som sydlig blotting.
2. Southern blotting blev udviklet af Edward M. Southern i 1975, såkaldt Southern blotting. På den anden side blev westernblotting udviklet af George Starks gruppe på Stanford University i 1979.
3. Sydlig blotting bruges til at finde ud af en specifik DNA-sekvens. Omvendt bruges westernblotting til at finde ud af en specifik aminosyre eller proteinsekvens.
4. Sydlig blotting fungerer efter princippet om hybridisering på flip side; western blotting fungerer efter princippet om immunodetektionsmetode eller antigen-antistof-interaktion.
5. Et enkeltstrenget DNA eller undertiden RNA anvendes som en sonde i sydlig blotting på den anden side, i den vestlige blotting anvendes primære og sekundære antistoffer som en sonde.
6. Agarosegelelektroforese anvendes i sydlig blotting, mens SDS PAGE / Polyacrylamidgel bruges til at adskille proteiner i western blotting.
7. Sydblotting følger kapillæroverførselsproceduren på den anden side; western Blotting følger proceduren for elektrisk overførsel.
8. Under sydlig blotting skal prøven denatureres, mens prøven under den vestlige blotting bør være i dens oprindelige tilstand.
9. Intet trin som blokering er involveret i sydlig blotting på vippesiden, under westernblotting blokeres ikke-specifikke antistofsteder på nitrocellulosepapiret ved hjælp af mælkepulver eller bovint serumalbumin (BSA).
10. Almindelige mærkningsmetoder, der bruges ved sydlig blotting, er brugen af ​​kromogene farvestoffer eller radiomærkning eller fluorescerende mærkning osv. Mens mærkningsmetoder, der anvendes i western blotting, er brugen af ​​fluorescerende mærket antistof eller radiomærkning, kromogen farvestoffer eller dannelse af diaminobenzidin osv.
11. Påvisning af lys, Autoradiograf og farveændringer bruges som detektionsmetoder i den sydlige blotting, hvorimod detektionsmetoder i den vestlige blotting er ændringer i farve og detektion af lys osv.
12. Sydlig blotting bruges til DNA-påvisning, faderskabstestning, DNA-fingering, til identifikation af ofre, til identifikation af kriminelle, til at finde infektionsmidler og til at identificere mutation eller genarrangement osv. Omvendt bruges westernblotting til at finde antallet af proteiner i en blanding, for at detektere tilstedeværelsen af ​​HIV, virus og bakterier osv. i serum, for at finde ud af mangelfulde proteiner og brugt som en bestemt foranstaltning for herpes, hepatitis B, Lyme sygdom og Creutzfeldt-Jacob sygdom osv.

Konklusion

Ovenstående diskussion opsummerer, at sydlig blotting er den ældste blotting-teknik, der bruges til at finde ud af specifikt DNA-segment i en prøve, mens western-blotting blev opdaget sidstnævnte og anvendt til at identificere en specifik sekvens af aminosyrer eller et specifikt protein.